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| 產地 | 國內 |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HXG712 |
| 用途 | 僅用科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
| 是否進口 | 否 |
漢坦病毒2型（HTV-2）試劑盒(熒光-PCR法)為上海滬崢PCR主要產品之一，產品優(yōu)勢 樣品種類多，質控嚴格，高特異性，供貨快，已被國內外廣大科研工作者使用，被稱謂：質量信得過產品
通用名稱：漢坦病毒2型（HTV-2）試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格：50T/盒
英文名稱：HTV-2Detection Kit (Real-Time PCR Method)
自備試劑：樣品 RNA
【檢驗原理】
本試劑盒對漢坦病毒2型（HTV-2）基因保守區(qū)設計特異性的引物和探針[1-3]，用熒光 PCR 技術對核酸進行體外擴增檢測，從而達到快速檢測之目的。
漢坦病毒2型（HTV-2）試劑盒(熒光-PCR法)試劑組成】
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名 稱 |
規(guī) 格 |
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酶液 |
50μL×1 管 |
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HTV-2反應液 |
500μL×2 管 |
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HTV-2陽性質控品 |
50μl ×1 管 |
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陰性質控品 |
250μl×1 管 |
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融不超過 5 次。有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本采集】取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g。
【保存和運輸】上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃。但不能超過 6 個月，標本運送應采用 0℃冰代。【使用方法】樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1 樣本前處理：
取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g，手術剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
2 DNA 提取
樣本 DNA 的提取采用 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。
試劑配制（試劑準備區(qū)）
根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 10 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：
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試劑 |
HTV-2反應液 |
酶液 |
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用量 |
20μL |
1μL |
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL，加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；
4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25ul；熒光通道選擇： 檢測通道
（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請勿選擇 ROX 參比熒光。
4.3 推薦循環(huán)參數設置：
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步驟 |
循環(huán)數 |
溫度 |
時間 |
收集熒光信號 |
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1 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
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2 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
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55℃ |
30sec |
是 |
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
注意事項
：所有試劑使用前需完全解凍，混合均勻，6,000rpm離心數秒后使用。
1. 樣本處理（樣本處理區(qū)）
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等，具體提取方法請參照相關說明書；陽性質控品及陰性質控品無需提取，可直接使用。
2. 擴增試劑準備（PCR前準備區(qū)）
取N個（N=陰性質控品+待檢樣本+陽性質控品）PCR反應管，每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s，轉移至樣本處理區(qū)。
2.加樣（樣本處理區(qū)）
3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質控品和陽性質控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉移至擴增區(qū)。
