牛鼻炎病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒
- 價(jià)格： ￥2280/盒
- 發(fā)布日期： 2021-03-16
- 更新日期： 2025-11-14
產(chǎn)品詳請(qǐng)
| 產(chǎn)地 |
國(guó)內(nèi)
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| 品牌 |
上海滬崢
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| 貨號(hào) |
HZT2347
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| 用途 |
僅用科研
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| 包裝規(guī)格 |
50T/盒
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| 是否進(jìn)口 |
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牛病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒
基本原理 先用隨機(jī)引物將 RNA 反轉(zhuǎn)錄成 cDNA，然后設(shè)計(jì)特異性的引物和熒光探針(TaqMan 探針),進(jìn)行 熒光定量 PCR 檢測(cè)。TaqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它設(shè)計(jì)為與目標(biāo)序列上游引物和下游引物 之間的序列配對(duì)。熒光基團(tuán)連接在探針的 5’末端，而淬滅劑則在 3’末端。當(dāng)完整的探針與目 標(biāo)序列配對(duì)時(shí)，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與 3’端的淬滅劑接近而被淬滅，但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí)， qTaq 聚合酶的 5’外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離,熒光強(qiáng)度得到檢測(cè)。 隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來(lái)的熒光基團(tuán)不斷積累，因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。
試劑盒準(zhǔn)備物品：
清理液（A） 毫升
染色液（t B） 微升
稀釋液（C） 毫升
溶解液（tD） 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
牛病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒
1．基礎(chǔ)程序。
2．?dāng)U增溫度和延伸溫度。
3．反應(yīng)時(shí)間。
4．循環(huán)次數(shù)。
5．PCR 反應(yīng)液的配制。
6．PCR技術(shù)的基本原理。
7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)。
8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。
9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
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