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| 產地 | 國內 |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HZW6543 |
| 用途 | 僅用科研 |
| 包裝規格 | 50T/盒 |
| 是否進口 |
【產品名稱】
商品名稱：新城疫病毒中強毒(NDV-W)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
【包裝規格】50 份/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于檢測的血清或血漿、疑似污染 NDV-W 的活病
毒疫苗等標本中禽網狀內皮組織增殖病病毒 RNA，適用于禽網狀內皮組織增殖病病
毒感染的輔助診斷。其檢測結果僅供參考。
新城疫病毒中強毒(NDV-W)檢測試劑盒(熒光-PCR法)【檢驗原理】
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數不超過 5 次，有效期 12 個月。
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
水樣便取 0.5~1mL；疑似污染的食物取 1g
上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。
1. 樣品處理（樣本處理區）
1.1 樣本前處理
水樣便 13000rpm 離心 2min，去盡上清；疑似污染的食物用手術剪剪碎混勻后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；疑似污染的水直接取 100μL
1) DNA 的提取也可以采用DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。
本試劑盒用一對禽網狀內皮組織增殖病病毒特異性引物，結合一條特異性熒光
探針，用一步法熒光 RT-PCR 技術對禽網狀內皮組織增殖病病毒 RNA 進行體外擴
增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
【試劑組成】
名 稱 規 格
酶液 50μl×1 管
REV 反應液 1.0ml×1 管
REV 陽性質控品 50μl ×1 管
陰性質控品 250μl ×1 管
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
新城疫病毒中強毒(NDV-W)檢測試劑盒(熒光-PCR法)結果分析條件設定
設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。
陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數增長曲線；
可疑：檢測通道 35
陰性：樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值。
陰性質控品：Ct 值>38 或無 Ct 值；
陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
反應五要素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數 個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
? 所有操作嚴格按照說明書進行；
? 試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完全混勻并短暫離心；
? 反應液應避光保存；
? 反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
? 使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服；
? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；
? 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
? 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通 則》進行處理。
