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| 產地 | 國內 |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HZW0837 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規格 | 48T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號 | |
| 是否進口 |
產品名稱：鹿源性成分(Deer)試劑盒(熒光-PCR法)
包裝：50T
用途:本產品僅供科研與實驗使用，不用于臨床診斷等
目的：本試劑盒適用于檢測疑似感染者或發病動物等組織、體液或淋巴結等標本中禽流感病毒rna，用于禽流感病毒感染的輔助診斷，其檢測結果僅供參考。
鹿源性成分(Deer)試劑盒(熒光-PCR法)PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。
鹿源性成分(Deer)試劑盒(熒光-PCR法)在PCR 管中加入下列成分：
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成份 |
樣品 |
陽性對照 |
陰性對照 |
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雙酶一管式 RT-PCR Buffer， 2× |
15 uL |
15 uL |
15 uL |
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EMCV 專一性引物對 |
2 uL |
2 uL |
2 uL |
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樣品 RNA |
1-5 uL |
無 |
2 uL |
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EMCV 陽性對照 |
無 |
2 uL |
無 |
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補超純水到 |
28 uL |
28 uL |
無 |
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MMLV-Taq Mix |
2 uL |
2 uL |
2 uL |
鹿源性成分(Deer)試劑盒(熒光-PCR法)操作步驟
取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g，手術剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
DNA 提取
樣本 DNA 的提取采用 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。試劑配制（試劑準備區）根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 10 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：
試劑
Duck 反應液
酶液
用量
20μL
1μL
加樣（樣本處理區）將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL，加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
PCR 擴增（核酸擴增區）
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；
4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25ul；熒光通道選擇： 檢測通道
（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請勿選擇 ROX 參比熒光。
4.3 推薦循環參數設置：
步驟
循環數
溫度
時間
收集熒光信號
1
1 cycle
95℃
10min
否
2
40 cycles
94℃
15sec
否
55℃
30sec
是
結果分析判定設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出
現整體傾斜時，根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。
判斷a) 檢測通道 Ct 值≤30，有 FAM 熒光信號檢出，并出現典型的擴增曲線，判斷樣品為陽性。
b) 當 30<Ct 值≤35 時，且有典型的擴增曲線時，則需重復實驗。再次擴增后檢測體系的Ct 值仍≤35，且有典型的擴增曲線，則判定該樣品含有相應的動物源性成分。當再次擴增后，檢測體系 Ct 值＞35，或無典型的擴增曲線，則判定該樣品不含相應的動物源性成分。
質控標準
a) 空白對照：無FAM 熒光信號檢出或 Ct 值≥35，未出現典型的擴增曲線。
b) 陰性對照：無FAM 熒光信號檢出或 Ct 值≥35，未出現典型的擴增曲線。
c) 陽性對照：有 FAM 熒光信號檢出，并出現典型的擴增曲線，Ct 值＜30。
d) 以上應同時滿足，否則本次實驗無效。
需要注意*：
PCR反應液請在冰中配制，然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法（Cool Start Method）與熱啟動法（Hot Start Method）相結合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應，增強PCR擴增的特異性，能得到良好的PCR結果。
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環。
如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，則會出現Smear。
鹿源性成分(Deer)試劑盒(熒光-PCR法)
1，嚴格的質控體系：所有試劑盒從原料到成品經過嚴格的質控，確保試劑盒質量及穩定性
2，產品不斷優化，很好的靈敏度；
3，綜合指標特性，研發便捷操作的試劑盒；
4，檢測驗證樣本多樣；
5，專業的研發團隊為客戶提供個性化的定*務；
6，提供食品安全藥物殘留Elisa試劑盒，以及快檢試劑盒
7，完善專業的售前售后服務
