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| 產地 | 國內 |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HZW0725 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規格 | 48T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號 | |
| 是否進口 |
牛布氏桿菌(BS)核酸檢測試劑盒(PCR法)
操作步驟
1 病毒 RNA 的提取
1.1 取已處理的樣品、陰性對照和陽性對照，分別加入裂解液 600 μL，充分顛倒混勻，室溫靜置 3～
5 min。
1.2 將液體吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液體時盡量不要吸到懸浮雜質，以免離心時 堵塞吸附柱），13000 rpm 離心 30 s。
1.3 棄去收集管中液體，加入 600 μL 洗液，13000 rpm 離心 30 s。
1.4 重復步驟 1.3。
1.5 棄去收集管中液體，13000 rpm 空柱離心 2 min，以除去殘留的洗滌液。
1.6 將吸附柱移入新的 1.5 mL 離心管中，向柱中央加入洗脫液 50 μL，室溫靜置 1 min，13000 rpm
離心 30 s，離心管中液體即為模板 RNA。
2 實時熒光 RT-PCR 操作
設被檢樣品、陰性對照和陽性對照總和為 N，則反應體系配制如下： 試劑 體系
無菌無核酸酶水 2.7（N+1）μL
RT-PCR 反應液 10（N+1）μL
酶混合液 0.4（N+1）μL
熒光探針 1.9（N+1）μL
將以上配制的反應體系充分混勻后，分裝每個反應管中各 15 μL。
分別取 5 μL 模板 RNA，加入相應反應管中，混勻并作好標記，在熒光 PCR 儀上進行以下反應：
45 ℃ 15 min，95 ℃ 1min；95 ℃ 5 s，60 ℃ 35 s，在每個循環第二步（60℃ 35s）收集熒光信號，共
40 個循環。（報告基團“FAM”，淬滅基團“None”）。
結果判定
1 結果分析條件設定 閾值設定原則：閾值線設定于剛好超過陰性對照擴增曲線的點。不同儀器可根據儀器噪音
情況進行調整。
牛布氏桿菌(BS)核酸檢測試劑盒(PCR法)2 結果描述及判定
陽性對照 Ct 值≤30 并出現特定的擴增曲線，陰性對照無 Ct 值并且無特定擴增曲線，實驗結果成 立；被檢樣品 Ct 值≤30 并出現特定的擴增曲線為 AIV 陽性；被檢樣品 30＜Ct＜37 并出現特定的擴 增曲線，需重新取樣提取 RNA，擴增后進行結果判定，如仍是可疑，可判定為陽性；被檢樣品 Ct 值≥37 時，超過本方法檢測靈敏度范圍，判定為陰性；對于某些未呈現 S 型曲線，但本底較高的樣 品，應為陰性。
◆ 注意事項
1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實驗要分區操作。
1）第一區：樣本制備區。
2）第二區：模板添加區。
3）第三區：擴增及產物分析區。
★ 分區之間*進行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。
2．實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區域獨立使用工具，需更換手套和實驗服。
3．嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。
4．反應液中的成分對光敏感，應避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應避免反復凍融，推薦使用前離心30秒，并按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。
5．反應結束后，擴增管請置于密封袋內丟棄，當日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。
6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內使用。
實驗操作
1.模板制備（樣本制備區）
建議使用配套水生動物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒系列產品，具體過程詳見產品說明書。
2.添加模板（模板添加區，放置于冰盒上進行）
剪下所需測試數的已含有反應液的PCR管，放置在室溫待解凍后，離心30秒后揭開封口膜，向每管反應液中分別加入5μL模板，順序為NG、待測樣品模板、PG-VH-P。蓋好配套的PCR管蓋后，渦旋混勻30s，離心1min，立即進行PCR擴增反應。
3. 擴增反應（擴增及產物分析區）
使用熒光定量PCR儀，熒光基團選擇FAM，淬滅基團選擇TAMRA。
