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| 產(chǎn)地 | 國內(nèi) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HZS0290 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 |
產(chǎn)品名稱：豬鏈球菌（通用型）檢測試劑盒（實時熒光PCR法）
檢測方法： 實時熒光 PCR
規(guī) 格： 50T
保存方式： 2~8℃
有 效 期： 1年
產(chǎn) 地： 中國
用 途： 僅用于科研實驗
豬鏈球菌（通用型）檢測試劑盒（實時熒光PCR法）
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豬鏈球菌（通用型）檢測試劑盒（實時熒光PCR法）
利用ELISA進(jìn)行檢驗常見的樣本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些樣本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。
1、抗原：ELISA抗原有三類：液體中純化的自然抗原、合成抗原和基因重組抗原。
純度不高可導(dǎo)致試劑盒的特異性不強，合成抗原一般都是多肽抗原，
試劑盒一般為基因重組抗原。抗原純度不高，特異性就不強，
2、抗體特異性和親和力的大小會影響試劑盒的特異性和敏感性
3、酶結(jié)合物，試劑盒的保存時間通常由酶的穩(wěn)定性決定。
最常用的就是辣根過氧化酶-HRP.其他還有堿性磷酸酶和β半乳糖苷酶。
ELISA溫浴和洗滌一般為磷酸鹽緩沖液（PBS）
堿性磷酸酶的話就不能用PBS洗滌了，因為殘留的PBS會抑制一半的酶活性。
TMB顯色液取代了OPD為HRP最常用的色原底物。為氧化還原反應(yīng)（OPD對機(jī)體有突變作用，所以改用TMB）
◆ 注意事項
1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實驗要分區(qū)操作。
1）第一區(qū)：樣本制備區(qū)。
2）第二區(qū)：模板添加區(qū)。
3）第三區(qū)：擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。
★ 分區(qū)之間*進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。
2．實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨立使用工具，需更換手套和實驗服。
3．嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴(yán)格按照說明書要求在冰盒上操作。
4．反應(yīng)液中的成分對光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心30秒，并按檢測頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。
5．反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。
6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。
實驗操作
1.模板制備（樣本制備區(qū)）
建議使用配套水生動物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒系列產(chǎn)品，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。
2.添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒上進(jìn)行）
剪下所需測試數(shù)的已含有反應(yīng)液的PCR管，放置在室溫待解凍后，離心30秒后揭開封口膜，向每管反應(yīng)液中分別加入5μL模板，順序為NG、待測樣品模板、PG-VH-P。蓋好配套的PCR管蓋后，渦旋混勻30s，離心1min，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
3. 擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）
使用熒光定量PCR儀，熒光基團(tuán)選擇FAM，淬滅基團(tuán)選擇TAMRA。
結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置基線（baseline）：一般情況下，對ABI 7500、7700等儀器設(shè)為6-15cycle，對PE5700設(shè)為3-15cycle,對MJ Research Option2設(shè)為6-12cycle。特殊情況可對基線適當(dāng)調(diào)整。
設(shè)置閾值（threshold）:以閾值線剛超過陰性對照擴(kuò)增曲線（無規(guī)則的噪音線）的zui高點。
結(jié)果判斷
陽性：檢測樣本Ct值小于等于35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長期；
可疑：檢測樣本Ct值大于35.0且小于40.0，重復(fù)一次實驗，如果Ct值仍小于40.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長期，為陽性，否則為陰性；
陰性：檢測不到樣本Ct值或Ct值為40。
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