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| 產(chǎn)地 | 國產(chǎn) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HZ-75230 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規(guī)格 | 20T/50T |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 |
上海滬崢專業(yè)生產(chǎn)銷售豬傳染性胃腸炎病毒一步法RT-PCR診斷試劑盒現(xiàn)貨，我公司供應(yīng)的分子生物學(xué)試劑品類齊全，且具有優(yōu)勢價格，歡迎新老客戶咨詢認(rèn)購。
產(chǎn)品詳細(xì)信息
名稱：豬傳染性胃腸炎病毒一步法RT-PCR診斷試劑盒現(xiàn)貨
規(guī)格： 20T/50T
品牌：上海滬崢
【用途】用于豬傳染性胃腸炎病毒病的檢測、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。
【操作步驟】
1.RNA提取
(1)取疑似豬傳染性胃腸炎病毒病的病料（空腸、小腸及其內(nèi)容物等），用Hank’s液或PBS研磨成1：3懸液，在－20 ℃反復(fù)凍融3次，經(jīng)3 000 r/min離心5 分鐘，上清液再經(jīng)12 000 r/min離心15分鐘，上清液－70 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>
(2)取200uL上清液（或標(biāo)準(zhǔn)品Ｔ），移入新的1.5mL滅菌EP管中，加入400uLSR-I，反復(fù)顛倒幾次混勻，室溫放置5~10分鐘。
(3)加入200uL氯仿，漩渦振蕩15秒混勻。室溫下放置2~3分鐘。
(4)12000r/min離心10分鐘，取上層水相(注意：切勿吸取到里兩相之間的雜質(zhì))，轉(zhuǎn)移到一個新的EP管中，再加入等體積異丙醇混勻，室溫放置10分鐘。
(5)12000r/min離心10分鐘，棄去上清，加入SR-II 700uL，充分洗滌沉淀RNA后，12000r/min離心5分鐘，小心吸去上清（注意：嚴(yán)格防止RNA丟失）。
(6)用潔凈吸水紙吸干管壁的SR-II，室溫放置2~3分鐘。用20uLTU-5溶解，即為模板，即用或-70℃凍存?zhèn)溆谩?/p>
72℃延伸
3.PCR操作
4.電泳
稱量0.25g瓊脂糖，放入錐形瓶，加入25mL 1×TAE液（可配置50×濃縮液，儲存?zhèn)溆茫谖⒉t中熔解，加入1.5μl的TU-9混勻。封閉好電泳槽，加入梳子，倒入瓊脂凝膠，待凝固后，將PCR產(chǎn)物6μl混合1.5μl TU-7，加樣于凝膠孔中，同時在相鄰孔加入3μlTU-8，在100v 電壓下，1×TAE液中電泳30分鐘，在紫外成像儀下觀察結(jié)果。
【結(jié)果判定】
在342bp（豬放線桿菌胸膜肺炎）及841bp（副豬嗜血桿菌）位置出現(xiàn)擴(kuò)增帶，實驗結(jié)果為陽性
豬傳染性胃腸炎病毒一步法RT-PCR診斷試劑盒
【注意事項】
1. 每次使用，開蓋之前請先瞬時離心，使試劑沉于管底。
2. 所有試劑在要求溫度下保存，-20℃保存試劑盡量減少反復(fù)凍融，使用后的試劑立即放回，避免在室溫擱置太久。
3. 盡量建立PCR試驗操作區(qū)，避免交叉污染。
4. 加樣和反應(yīng)程序嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，由于操作失誤、移液器不精確、定時不準(zhǔn)確造成無結(jié)果情況，不予負(fù)責(zé)。
5. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，要高壓滅菌，操作過程盡量不要用手接觸到管內(nèi)壁，可用鑷子夾取。
6. 注意防止試劑污染，在有效期限前用完。
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